腺病毒构建效劳
一、手艺简介：
重组腺病毒（Adenovirus）是一种现在最高效可靠的重组病毒表达系统之一 ，可用于在哺乳细胞中瞬时及高水平地表达shRNA或目的卵白质。
其具备以下优点：
1. 宿主规模广：腺病毒除可熏染一系列哺乳动物细胞,除可熏染险些所有人的细胞类型外 ，还可熏染包括大鼠、小鼠、兔、猪、羊、猴、鸡等物种。
2. 因腺病毒的熏染不依赖细胞周期 ，故其既可以熏染增殖细胞也可以熏染非增殖细胞。
3. 瞬时高效表达 ，不整合到基因组中。
4. 病毒滴度高 ，可用于动物水平的实验。
本系统是以Ad5血清型E1/E3缺陷型腺病毒DNA为骨架、在克隆、包装、扩增等各部条件做了刷新和优化 ，抵达了克隆阳性率更高 ，质量更可靠 ，包装稳固 ，出毒迅速 ，滴度高等效果。所包装的腺病毒已乐成应用于凋亡检测、染色质免疫沉淀（ChIP）、RT-PCR、Co-IP等科研实验。
二、实验办法及周期：
1. 将目的基因插入腺病毒重穿梭质粒中 ，实验周期为7个事情日 ， 如要求对载体的特定部件有所要求而需举行特殊刷新 ，则此步实验蹊径及实验周期另行划定。
2. 将目的基因转移至腺病毒骨架中 ，实验周期为7个事情日。
3. 将确定准确的重组腺病毒质粒在293A细胞举行包装 ，时间约为20个事情日。
4. 腺病毒扩增和CsCl纯化 ，实验周期为7个事情日。
5. 对包装出的重组病毒举行质检。
质检包括对终产品病毒基因举行PCR和WB以确认目的基因的保存 ，实验周期为5个事情日。
三、效劳允许：
1. 提供的病毒量为1ml滴度>1010VP/ml ，如需更大批的病毒请详细再商洽。
2. 提供穿梭质粒 ，重组腺病毒质粒及相关酶切判断电泳图 ，测序报告、终产品PCR或WB判断的实验报告。
3. 为了确保效劳质量 ，条约周期为在实验周期的基础上加10个事情日。
四、应用实例：
腺病毒熏染原代神经元
Fig1:Infection efficiency of Ad-Fos in CGNs. DIV5 CGNs were infected with Ad-Fos at MOI of 100. Thirty six hours after infection phase-contrast light and fluorescent micrographs of the infected cells were visualized. The cells infected with Ad-Fos were fixed and were stained with a Flag-specific M2 antibody or without a primary antibody (-1°). Infection efficiency of adenovirus is about 80%.
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