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高效液相制备纯化手艺是一种在生物医药行业中很是要害的纯化手艺，使用差别的化学性子来疏散混淆物中的种种组分 。在医药研发领域，完整的杂质研究和充分的杂质控制，直接关系到药品的清静性和有用性，是药物乐成获批的主要因素之一 。
然而，杂质研究的难点在于识别和控制那些在生产历程中或稳固性研究中爆发的未知且顽固的杂质 。这些杂质的天生气制重大，结构未知，难以通过通例要领举行追踪和剖析 。在这一挑战眼前，制备液相手艺成为解决难题的利器 。作为一种高效的疏散手艺，HPLC能够从重大的样品中疏散出微量的杂质，为进一步的结构判断和毒性评估提供了可能 。这不但解决了杂质研究中的要害难题，也为药品的清静性和有用性提供了更为坚实的包管 。
尊龙凯时云课堂约请工艺剖析部李墨，为您深入剖析HPLC操作的要害注重事项，并提供解决常见操作难题的战略和要领 。
点击下方“/video/hplc-technology.shtml”，回首李墨先生的整场直播 。
01 刚提到的降低柱温用来增添化合物保存，可是我遇到过升高柱温化合物保存也增添的情形，这是什么缘故原由呢？
李墨：在色谱剖析中，通常降低柱温，溶质的保存时间会增添 。在少数情形下，我们化合物的保存时间会随着温度增添而增添，缘故原由可能是溶质分子爆发了离子化，或者跟溶质分子的结构有关系，或者牢靠相可能会随着温度改变，都可能导致保存时间的增添 。
02 制备样品的消融性要怎么试？有什么好的建议呢？
李墨：首先拿到样品之后，建议是先咨询合成部分同事，询问化合物是从什么溶剂中旋蒸出来的，相识化合物的原始溶剂 �；蛘呔傩惺笛�，可以称取几个约10毫克的样品于进样小瓶中，准备举行消融性测试 。向每个样品中加入100微升的稀释剂，视察其消融性 。若是样品不溶，可以逐步增添稀释剂量 。若是视察到样品在中性条件下不溶，可以思量加入少量的酸或碱以资助消融 。常用的溶剂一样平常可以思量使用甲醇乙腈，若是这些溶剂无法消融样品，可以实验更通用的溶剂，如二甲基亚砜（DMSO）、二甲基甲酰胺（DMF）、四氢呋喃（THF）或N-甲基吡咯烷酮（NMP） 。这些试消融性的样品后续可以用来举行要领开发，也不铺张样品 。
03 什么是预饱和？目的是什么？
李墨：预饱和手艺在色谱剖析中饰演着主要的角色，其主要目的是�；ど字�，并维持其性能的稳固性 。预饱和可以避免色谱柱内的牢靠液流失，在流动相进入色谱系统之前，预饱和柱会对流动相举行处置惩罚，使其与牢靠液充分接触，抵达饱和状态 。饱和之后再进入剖析柱当中，就会避免剖析柱中的牢靠液流失，从而坚持我们色谱柱的性能稳固 。
04 �；ぶ豢沙Ω迷趺聪村�？
李墨：直播提到�；ぶ豢晒磺苛页�，是由于可能会对填料爆发一定损伤，若是�；ぶ浩鹞廴�，可以将其拧开并拆开，取出柱芯，使用50%异丙醇溶液举行洗濯，以去除外貌吸附的样品 。爆发一些强污染的时间，可以像通例的色谱柱一样举行单独的冲洗，把污染物冲出来 。要注重按期检查�；ぶ睦砺鬯迨�，以评估柱效是否下降 。同时注重压力是否异常上升，这些可能是替换�；ぶ男藕� 。由于�；ぶ粲诤牟�，当性能下降时，只需替换柱芯，无需替换整个色谱柱，这样可以节约本钱并坚持剖析的一连性 。
05 结构类似物实战中用哪些柱子疏散呢？
李墨：选择哪种色谱柱取决于待疏散分子的化学性子、巨细、极性以及所需的区分率和选择性 。好比关于苯环类化合物，特殊是卤代苯（如氯苯、溴苯等），使用苯基柱可以提高疏散效果，关于苯环上的取代基团位置差别，也可以思量使用五氟苯基柱等等 。
06 怎么解决峰型异常的问题？好比分叉峰之类
李墨：在色谱剖析历程中，我们可能会遇到一些常见的问题，如样品过载、溶剂使用不当、色谱柱污染或失效等 。这些问题都可能会导致峰型异常，影响剖析效果的准确性 。解决步伐可以思量使用降低样品的载样量，好比降低它的浓度，或者镌汰样品的进样体积，或者替换样品溶剂等等，若是色谱柱泛起污染或效能降低，替换新的色谱柱可以恢复剖析的准确性和重复性 。
07 李墨先生特殊分享：保存因子K的公式推导历程
保存因子k：用牢靠相中的溶质分子总量，除以流动相中的溶质分子总量来获得 。流动相和牢靠相中的分子量即是样品的浓度(Cs和Cm体现)乘以相的体积(Vs和Vm体现),因此可以指导出等式
k=(CsVs)/(CmVm)=( Cs/Cm)/( Vs/Vm)
=KΨ（k是平衡常数，Ψ是流动相和牢靠相的比值）
溶质分子一定会泛起在牢靠相或者流动相里,假设流动相里的溶质分子分数为R，在牢靠相的溶质分子分数就应该是1-R，因此就可以获得
k=(1-R)/R
或者
R=1/(1+k)
溶质分子X的保存时间可以界说为距离除以速率，这里的距离就是色谱柱的长度L，色谱带的速率是ux:
tR=L/ux
同样地,溶剂峰的保存时间就是
t0=L/u
式中,u是流动相的平均速率 。把等式的L去除之后就衍生出下面这个等式
tR=t0u/ux
溶质分子X 通过色谱柱时的移动速率或者速率ux，可以通过盘算在任何时间里泛起在流动相内的该分子的分数R 来得出 。一样平常来讲，ux应该即是R 乘以移动的速率或者溶剂分子的流动速率U:
ux=Ru0
以是用ux=Ru和R=1/(1+k)举行取代tR=t0u/ux,就获得下面的等式
k=(tR/t0)-1
式中tR 为化合物保存时间，t0为死体积时间
若是您关于新药研发临床前研究历程中有一些疑心或者想要深入相识的专题内容，可以谈论区留下您的问题和建议，尊龙凯时希望和您一起，探索新药研发的巧妙天下 。
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