尊龙凯时酶联免疫吸附试验手艺效劳

2016-03-30

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酶联免疫吸附试验（ELISA）手艺效劳：种种酶联免疫吸附试验的检测、酶联黑点图像的剖析、克隆形成自动剖析、溶血黑点实验、病毒斑等。

酶联免疫吸附试验

免疫酶手艺(immunoenzymatic technique) 最早应用的免疫酶手艺是免疫酶组织化学染色，即用标记的抗体与标本中的抗原爆发特异性连系，当加入酶的底物时，在酶的作用下经一系列生化反应爆发有色物质，借助光镜作出定位判断。现在，应用最普遍的是酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)。该法特异性强，敏感性高，既可检测抗体，又能测定可溶性抗原。ELISA常接纳的酶为辣根过氧化物酶(hosradish peroxidase，HRP)，其底物是二氨基苯胺(DAB)，底物被剖析则呈棕褐色，可目测或借助酶标仪比色。

酶联免疫吸附测定enzyme linked immunosorbent assay（简写ELISA）指将可溶性的抗原或抗体连系到聚苯乙烯等固相载体上，使用抗原抗体连系专一性举行免疫反应的定性和定量检测要领。

ELISA是将抗原与抗体免疫反应的特异性，同酶的高效催化作用相连系，而建设的一种非放射性标记免疫检测手艺�？梢远ㄐ曰蚨考觳馓逡褐械陌肟乖⒖乖涂固�。该手艺用化学要领使酶与抗原或抗体結合天生酶标记物，或通过免疫要领将酶与抗酶抗体相连系天生酶抗体连系物。

酶联免疫吸附试验(Elisa)的基来源理有三条：
（1）抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体外貌，可能是卵白和聚苯乙烯外貌间的疏水性部分相互吸附，并坚持其免疫学活性；
（2）抗原或抗体可通过共价键与酶毗连形成酶连系物，而此种酶连系物仍能坚持其免疫学和酶学活性；
（3）酶连系物与响应抗原或抗体连系后，可凭证加入第五的颜色反应来判断是否有免疫反应的保存，并且颜色反应的深浅是与标本中响应抗原或抗体的量成正比例的，因此，可以按底物显色的水平显示试验效果。
酶联免疫剖析用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶毗连，然后通过酶与底物爆发颜色反应，用于定量测定。测定的工具可以是抗体也可以是抗原。

酶联免疫剖析测定要领：主要研究要领有间接法（常用于检测抗体）/双抗体夹心法（常用于检测抗原）/抗原竞争法（既可检测抗原，亦可检测抗体）。
1、测定抗体的间接法
a．将抗原吸附于固相载体外貌，洗涤除去未吸附的抗原。
b．加抗体，保温，形成抗原—抗体复合物洗涤除去其余的杂卵白。
c．加酵标抗抗体，保温，洗涤。
d．加入底物，测定底物的降解量二抗体量。
2、测定抗原的双抗体夹心法
首先将特异抗体的免疫球卵白吸附在反应板凹孔内，洗涤除去未吸附的抗体，加入含有抗原的待测溶液，保温形成抗原—抗体复合物，洗涤除去杂卵白后再加上述特异抗体，由于抗原是多价的并未被抗体饱和，经保温则可形成抗体—抗原—抗体复合物，洗涤后加酶标抗抗体，保温洗涤后加底物呈色，中止酶活性，比色测定抗原量。
3、测定抗原的竞争法

将含有特异抗体的免疫球卵白吸附在两份相同的载体（甲）和（乙）中，然后在（甲）中加入酶标抗原和待测抗原，（乙）中只加酶标抗原，其浓度相同于（甲）中加入的酶标抗原的浓度，保温洗涤后加底物呈色。待测液中未知抗原量愈多，则酶标抗原被连系的量就愈少，有色产品就愈少，以此便可测出未知抗原的量，即即是（甲）与（乙）底物降解量的差值。

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酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附测定

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