裸鼠成瘤实验

2016-01-19

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尊龙凯时药理学效劳为您提供裸鼠成瘤、裸鼠皮下成瘤等试验，详情可联系获得。邮箱：marketing@medicilon.com.cn 电话：021 58591500。

裸鼠效劳流程

1、操作计划设计
2、要领开发
3、细胞制备
4、裸鼠成瘤

裸鼠皮下成瘤动物实验要领

分组:SW620细胞组、SW620转染无关siRNA组、SW620转染目的基因（每组6只）。
细胞准备及注射裸鼠要领：到动物室准备实验。

取出未作处置惩罚的小鼠和处置惩罚后小鼠用鼠笼，顺序摆放在超净台中。选体形较大的小鼠称重，以3μl/g剂量，腹腔注射10％水合氯醛麻醉小鼠。约5分钟，小鼠最先进入清静状态，将其仰卧牢靠。切忌镇痛剂过量使用。

(1)铺白布于鼠板上，仰卧位牢靠小鼠四爪，碘伏棉球消毒腹侧面上至颈部、下至腹股沟、后至腋后线。消毒两次。铺手术巾于小鼠上，在其左侧剪口（4*4cm），袒露其左侧腹部, 用碘伏消毒一次。在左侧肋弓下缘1cm处向下剪开2cm皮肤，袒露腹壁肌肉，镊子牵拉腹壁肌肉，避开腹腔内脾脏，剪开腹壁肌肉，袒露内脏。用棉签蘸PBS，拨出脾脏下极，切忌牵拉，以免损伤脾脏和胰腺。
(2)找到脾脏同时，用25微升Matrigel混淆于细胞管中，打悬细胞沉淀，使细胞疏散匀称成单细胞悬液。用BD针吸净EP管中的单细胞悬液，稍退针芯，打出气泡，在脾脏下极内侧（凹面）进针向脾门偏向约2mm最先注射细胞，注射完毕停留约30秒钟，缓慢退出针，以防细胞渗透。同时用蘸PBS的棉球榨取周围出血点止血。
(3)用注射器吸收庆大霉素注射液（专心理盐水250：1稀释）约400微升，注入腹腔，棉球蘸干皮缘渗透的抗生素�Ｗ钕确旌细贡诩∪猓ㄒ涣旌�4针）。再次用注射器吸收庆大霉素注射液约400微升冲洗缝合口，棉球蘸干。缝合皮肤（中止缝合4针）。碘伏棉球消毒缝合口。吊销牢靠，使小鼠处于自然体位，放于鼠笼中。
(4)所有细胞注射完毕，剪耳标记，纪录剪耳标记及分组情形。
Day5-7：注重小鼠的状态，实时发明小鼠是否有因手术刺激、胰腺损伤、熏染等殒命的情形。
Day42：颈椎离断，正法小鼠，剖解遗体，视察脾脏肿瘤生长状态，肝脏、肺脏及其他器官是否有转移瘤形成。所有可疑组织均做好标记，照相，若有外貌结节，计数后，冻于液氮中。视效果情形用10%甲醛溶液牢靠住宿后做病理。

裸鼠皮下成瘤实验技巧

1、细胞状态是成瘤实验的要害，以是细胞生长状态一定要好，取处于对数生恒久的细胞，细胞达80-90%左右密度为宜;网络细胞前一天晚上替换新鲜作育基。
2、胰酶消化细胞后用预冷的PBS洗两遍，目的为去除细胞中的血清。
3、用PBS或者无血清作育基奏乐细胞沉淀至合适的浓度，一样平常皮下瘤接种的细胞量为1-5×10^6个细胞/支，接种体积为0.1ml，因此细胞悬液的浓度为1-5×10^7个细胞/ml。
4、细胞消化后应尽快接种到裸鼠皮下，一样平常只管在半小时内完成，途中将细胞悬液放在冰上降低细胞的代谢。
5、选择的裸鼠一样平常在5-8周龄，体重18-20g左右，莳植部位选择血供富厚区域，如腋窝中后部、腹股沟中上部。
6、接种前用枪将细胞悬液充分的吹散，避免细胞成团而降低细胞成活率。
7、接种时，针头在皮下进针深一点，约1cm深，镌汰注射后细胞悬液从针眼溢出。
8、怎样抓牢裸鼠?左手拇指和食指捏紧裸鼠颈背部皮肤，小拇指夹住裸鼠尾巴。

9、接种后一周左右可以见到皮下最先泛起肿块。
10、凭证肿瘤细胞的特征和接种细胞的量，一样平常皮下成瘤的周期为1-2个月。肿瘤不宜生长过大，一样平常不要凌驾1000mm3 ，肿瘤负荷过大常�；嵋晕シ炊锫桌矶辉又旧绲竽�(由于这个问题凄凉地被plos one拒过稿）。
11、肿瘤巨细丈量一样平常为1周两次，游标卡尺丈量肿瘤最长和最短部位。V=1/2*a*b2 (a为长轴，b为短轴)。
12、皮下瘤取下后一部分冻液氮用作以后提卵白和RNA，一部分福尔马林牢靠用做免疫组化、免疫荧光等。

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裸鼠皮下成瘤动物实验要领

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